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核体系酵母双杂文库

产品介绍

    核体系酵母文库

    青岛欧易母公司-上海欧易生物成立之初即开展了酵母文库构建方面的工作,现结合多年构建文库的经验,推出两套酵母双杂交文库构建体系:一是clonetech体系,在现有酵母双杂交文库构建流程(Clontech专利的BD MatchmakerTM library)基础上加入独特步骤,使文库中高丰度表达基因明显降低,从而使筛选时假阳性率明显降低;二是Invitrogen体系,专利的Gateway位点特异性重组技术(Cloneminer cDNA library construction kit)构建双杂交文库。

    1. Clontech酵母双杂交文库

    服务内容

    ▪均一化酵母双杂cDNA文库

    总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA均一化→均一化cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态(真核生物同源重组修复)→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库→效价→集合所有克隆得到最终文库。

    ▪普通酵母双杂cDNA文库

    总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态(真核生物同源重组修复)→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库效价→集合所有克隆得到最终文库。


    技术指标

    ▪库容量≥106;

    ▪文库滴度≥107cfu/ml;

    ▪插入片段平均大于1kb(该数据以人类样本构建酵母双杂文库的结果为参照,如样品物种不同,且无参考数据,则我们不作出承诺);

    ▪减低高丰度表达基因10-100倍。


    提供内容

    ▪详细的实验报告;

    ▪文库质粒、菌液 。


    服务周期

    ▪获得合格的总RNA后,45个工作日


    2. Invitrogen 酵母双杂交文库

    技术特点

    ▪ 实验起始量需5µg mRNA,所以要求客户提供足够量的样品或总RNA;

    ▪ 由mRNA反转录成cDNA构建文库,不经过PCR过程避免冗余现象,保证文库质量;

    ▪根据gateway的技术路线建库,提供的初级文库可以当做普通cDNA文库使用;

    ▪次级文库质粒既可用共转又可用mating的手段筛库;

    ▪如果次级文库用完可以用初级文库再次与AD载体重组获得次级文库。


    技术指标

    ▪ 库容量≥106;

    ▪ 文库滴度≥107cfu/ml;

    ▪ 插入片段平均大于1kb(该数据以人类样本构建酵母双杂文库的结果为参照,如样品物种不同,且无参考数据,则我们不作出承诺)。


    提供内容

    ▪详细的实验报告

    ▪初级文库质粒、菌液

    ▪次级文库质粒、菌液

    备注:如果客户需要转化酵母,我们可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。


    服务周期

    ▪获得合格的总RNA后45个工作日,如需转化酵母延长15个工作日。


    材料要求

    ▪为客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库,由客户提供组织、细胞或总RNA。