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酵母文库

产品介绍

    一、核体系酵母文库

    青岛欧易母公司-上海欧易生物成立之初即开展了酵母文库构建方面的工作,现结合多年构建文库的经验,推出两套酵母双杂交文库构建体系:一是clonetech体系,在现有酵母双杂交文库构建流程(Clontech专利的BD MatchmakerTM library)基础上加入独特步骤,使文库中高丰度表达基因明显降低,从而使筛选时假阳性率明显降低;二是Invitrogen体系,专利的Gateway位点特异性重组技术(Cloneminer cDNA library construction kit)构建双杂交文库。

    1. Clontech酵母双杂交文库

    服务内容

    ▪均一化酵母双杂cDNA文库

    总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA均一化→均一化cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态(真核生物同源重组修复)→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库→效价→集合所有克隆得到最终文库。

    ▪普通酵母双杂cDNA文库

    总RNA提取、纯化→LD PCR 合成cDNA→cDNA产物与线性化的AD质粒共转化于酵母感受态(真核生物同源重组修复)→所有转化液涂于40-100块15cm平板→计数文库效价→集合所有克隆得到最终文库。


    技术指标

    ▪库容量≥106;

    ▪文库滴度≥107cfu/ml;

    ▪插入片段平均大于1kb(该数据以人类样本构建酵母双杂文库的结果为参照,如样品物种不同,且无参考数据,则我们不作出承诺);

    ▪减低高丰度表达基因10-100倍。


    提供内容

    ▪详细的实验报告;

    ▪文库质粒、菌液 。


    服务周期

    ▪获得合格的总RNA后,45个工作日


    2. Invitrogen 酵母双杂交文库

    技术特点

    ▪ 实验起始量需5µg mRNA,所以要求客户提供足够量的样品或总RNA;

    ▪ 由mRNA反转录成cDNA构建文库,不经过PCR过程避免冗余现象,保证文库质量;

    ▪根据gateway的技术路线建库,提供的初级文库可以当做普通cDNA文库使用;

    ▪次级文库质粒既可用共转又可用mating的手段筛库;

    ▪如果次级文库用完可以用初级文库再次与AD载体重组获得次级文库。


    技术指标

    ▪ 库容量≥106;

    ▪ 文库滴度≥107cfu/ml;

    ▪ 插入片段平均大于1kb(该数据以人类样本构建酵母双杂文库的结果为参照,如样品物种不同,且无参考数据,则我们不作出承诺)。


    提供内容

    ▪详细的实验报告

    ▪初级文库质粒、菌液

    ▪次级文库质粒、菌液

    备注:如果客户需要转化酵母,我们可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。


    服务周期

    ▪获得合格的总RNA后45个工作日,如需转化酵母延长15个工作日。


    材料要求

    ▪为客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库,由客户提供组织、细胞或总RNA。



    、膜体系酵母文库构建

    传统的酵母双杂交系统仅限于核蛋白的互作分析,不能进行膜蛋白的研究。DUALmembrane 系统(DUALmembrane system)首先由瑞士的Dualsystems Biotech AG 公司开发出来,是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统,它提供了不同于常规酵母双杂交系统的蛋白体内分析方法,使得分析膜蛋白间的互作成为现实。


    技术优点

    ▪在体内原位检测蛋白-蛋白间的相互作用而无需核定位信号

    ▪使用小的泛素结构域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化

    ▪蛋白间的互作信号靠泛素特异性结合蛋白(UBPs)剪切人工转录因子(LexA)启动,而不是靠转录,因此可以检测蛋白自身的转录激活或抑制序列

    ▪此体系可以用来研究两个膜蛋白的相互作用和一个膜蛋白与一个胞质蛋白的相互作用

    ▪任何一种膜蛋白都可以作为诱饵,能使与待检测蛋白融合的相互作用模块(Cub-PLV-NubG)定位在细胞质内


    服务内容

    ▪普通酵母双杂cDNA文库;

    ▪均一化酵母双杂cDNA文库。