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膜体系酵母双杂

产品介绍

    膜体系酵母文库构建
           基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统,区别于传统的核蛋白互作分析,可用于研究膜蛋白间及膜蛋白与胞质蛋白间的互作。

           泛素是一种含76个氨基酸的保守蛋白,常作为降解信号连接在蛋白质的N端。泛素能被其特异性的蛋白酶(ubiquitin-specific proteases, UBPs)识别并从所连接的蛋白上切割下来,切割位点总是位于泛素蛋白的C端。在酵母细胞中,泛素可以分成两部分分别表达,即其N端部分(NubI, 第1~34位氨基酸)和C端部分(Cub, 第35~76位氨基酸),后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白([NubI: Cub]-reporter)体系。但是,NubI与Cub具有高亲和力并能自发重组形成异源二聚体。当NubI的第13位异亮氨酸被甘氨酸取代后,NubG与Cub之间的亲和力降低。于是NubG与Cub-LexA之间只有依靠蛋白互作而连接起来,两个互作蛋白分别与NubG和Cub-LexA融合。这样,通过检测转录因子LexA的切割就可以检测两个蛋白之间的互作关系。当位于细胞膜上的两个蛋白发生相互作用时,分别融合于其氨基酸C端的泛素蛋白前半部分(Cub)和后半部分(NubG)因距离靠近而形成一个完整的泛素蛋白分子,于是诱导UBPs识别并于其C端进行剪切,从而释放出转录因子LexA,最终启动核报告基因的转录。


          

     

    技术优点

    ▪在体内原位检测蛋白-蛋白间的相互作用而无需核定位信号

    ▪使用小的泛素结构域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化

    ▪蛋白间的互作信号靠泛素特异性结合蛋白(UBPs)剪切人工转录因子(LexA)启动,而不是靠转录,因此可以检测蛋白自身的转录激活或抑制序列

    ▪此体系可以用来研究两个膜蛋白的相互作用和一个膜蛋白与一个胞质蛋白的相互作用

    ▪任何一种膜蛋白都可以作为诱饵,能使与待检测蛋白融合的相互作用模块(Cub-PLV-NubG)定位在细胞质内


    服务内容

    ▪普通酵母双杂cDNA文库;

    ▪均一化酵母双杂cDNA文库。