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干货 | 警惕看不见的PCR实验室污染——气溶胶

时间:2022-08-30   访问量:517


大家在做分子生物学实验的时候,难以避免的问题就是污染问题,尤其在进行PCR实验的时候,一小点点污染就会影响检验结果的准确性,那么这个污染问题是否让你焦头烂额呢?接下来,小编带你一起认识一下污染之一的气溶胶污染。


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一、什么是气溶胶


气溶胶(aerosol)是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,又称气体分散体系。其分散相为固体或液体小质点,大小为0.01-100微米。这些颗粒对于检测实验影响很大,其中对PCR的影响一直是让实验室人员头痛的一件事。PCR核酸检测灵敏度高,特异性强,对于诊断起着重要作用,但是稍不留神,在操作过程中容易受到气溶胶污染,导致结果不准确。


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二、气溶胶污染的产生


PCR产物的污染主要发生在产物的分析阶段,极微量的PCR产物就会造成分析污染。此外,在空气与液体摩擦时也极易形成气溶胶,所以我们在实验中打开ep管、离心管的瞬间;移液管取液、混匀的瞬间;打喷嚏、咳嗽、说话的时候等都会造成气溶胶污染。


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三、气溶胶污染的确定


实验室应通过以下途径及时发现污染 :采用每次检测过程至少3个阴性对照随机置于临床样本中间参与提取全过程;每天对实验室内空气进行采样监测;空气监测范围应至少应包括样本制备区和扩增产物分析区;定期对实验室台面、门把手、仪器设备表面进行取样监测。


四、如何减轻或避免气溶胶污染


01 严格实验室功能分区

原则上检测实验室应当设置以下区域:试剂储存和准备区、样本制备区、扩增和产物分析区根据使用仪器的功能,区域可适当合并。各区域在物理空间上应当是相互独立的。传递窗满足密封性要求,不能有空气的直接相通。各项检测工作应严格按相应规定在各自的区域内进行,严禁在样本制备区配制试剂。各区的功能是:

试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

样本制备区:核酸提取及其加入至扩增反应管等。

扩增和产物分析区:核酸扩增和产物分析。


02 确保实验室人、物及空气单向流动

核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区→样本制备区→扩增和产物分析区,防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。空气流向应按照从试剂储存和准备区→样本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。


03 实验室检测安全管理

应当在生物安全二级实验室进行,并应在生物安全风险评估的基础上,采取适当的个体防护措施,包括手套、口罩和隔离衣等。应使用75%酒精进行桌面、台面及地面消毒,需要对实验室环境进行清洁,消除可能的核酸污染。

①实验室空气清洁。实验室每次检测完毕后,可采用房间固定和/或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。

②工作台面清洁。每天实验后,使用75%酒精进行台面、地面清洁。

③生物安全柜消毒。实验使用后的耗材废弃物放入医疗废物垃圾袋中,包扎后使用75%酒精喷洒消毒其外表面。手消毒后将垃圾袋带出生物安全柜放入实验室废弃物转运袋中。试管架、实验台面、移液器等使用75%酒精进行擦拭。随后关闭生物安全柜,紫外灯照射30分钟。

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